خلاصة:
سابقه و هدف: فیبروبلاست ها سلول های مزانشیمی هستند که به آسانی در آزمایشگاه کشت داده می شوند و نقش مهمی در تقابلات مزانشیم و اپیدرم و ترشح فاکتورهای رشد و سایتوکاین ها مختلف دارند که اثر مستقیمی بر رشد و تمایز اپیدرم و تشکیل ماتریکس خارج سلولی دارند. تحقیق حاضر با هدف بررسی امکان تهیه و تولید استاندارد فیبروبلاست انسانی صورت گرفت. مواد و روش ها: تحقیق به روش اکتشافی انجام گرفت. از ناحیه درم پوست ختنه گاه نوزاد برای تهیه فیبروبلاست استفاده شد. فیبروبلاست ها توسط آنزیم تریپسین جدا گشته و به منظور ایجاد بانک فیبروبلاست چندین بار در محیط DMEM کشت داده شدند. سلول ها از نظر آلودگیهای باکتریایی و ویروسی با روشهای مولکولی و از نظر کاهش عرضه آنتی ژن های MHC تا پاساژ دهم مورد بررسی قرار گرفتند. همچنین برای یافتن اختلالات ژنومی، کاریوتایپ سلول های پاساژهای اول، پنجم، دهم و بیست و دوم تعیین شد.
یافته ها: فیبروبلاست های به کاررفته برای تولید بانک سلول از نظر وجود برخی ویروس ها و باکتری ها به روشهای مولکولی مورد بررسی قرار گرفته که نتایج همگی منفی بود. بررسی سلول های پاساژ داده شده از لحاظ میزان عرضه آنتی ژن های MHC در سطح آنها نشان داد که میزان این آنتی ژن ها به مرور در طی پاساژها کم شده است. نتیجه کاریوتایپینگ سلول های فیبروبلاست پاساژ اول، پنجم و دهم طبیعی بود ولی کاریوتایپینگ فیبروبلاست های پاساژ بیست ودوم نشان دهنده ناهنجاریهای زیادی در کروموزوم های این سلول ها بود. جداشدگی کروموزوم ها از محل سانترومر در تعداد قابل توجهی از کروموزوم ها مشاهده شد.
نتیجه گیری: بهترین زمان برای ایجاد یک بانک فیبروبلاست از نظر حداکثر میزان فعالیت فیبروبلاست ها، کمترین میزان آنتی ژنیسیتی و نیز عدم وجود اختلالات ژنتیکی، سلول های پاساژ پنجم تا دهم است. برای ممانعت از بروز اختلالات ژنتیکی در فرایند کشت مجدد فیبروبلاست ها باید تمهیداتی از جمله انتخاب بهترین کلون ها از نظر عاری بودن از ناهنجاریهای کروموزومی در کاریوتاپینگ و نیز به حداقل رساندن زمان جداسازی سلول ها در روش آنزیماتیک مد نظر قرار گیرند
Background and Aim: Fibroblasts are mesenchymal cells that can be readily cultured in the laboratory and play a significant role in epithelial-mesenchymal interactions، secreting various growth factors and cytokines that have a direct effect on epidermal proliferation، differentiation and formation of extracellular matrix. They have been incorporated into various tissue-engineered and used for a variety of clinical applications، including the treatment of burns، chronic venous ulcers and several other clinical applications in dermatology and plastic surgery. Establishment of standard human fibroblast bank is the basis of some important researches. Material and Methods: Foreskin was obtained aseptically from patient younger than 1 year old during surgical excision. Fibroblasts isolated by enzymatic treatment were cultivated successively in a culture medium to establish cell banking. The cells were checked to be negative for HBV، HCV، HIV، HSV-I، HSV-II، EBV، CMV، Treponema pallidum، Mycoplasma sp. and Chlamydia. First، 5th and 10th subcultured cells were processed for immunocytochemistry studies using a panel of monoclonal antibodies including antibodies to MHC class I & II antigens for checking of elimination of superficial cell antigens during cultivation. First، 5th، 10th and 22nd subcultured cells were karyotyped to find any chromosomal abnormalities. Results: The fibroblasts used in production of cell bank were checked for some bacteria and viruses by molecular methods and confirmed to be negative. The results of karyotyping of cultured fibroblasts after 22nd passages show abnormalities. Multiple centromeric fissions were present in the various metaphase spreads. There were multiple clones with variable rearrangements and chromosome fissions. Expression of HLA on the fibroblast surfaces was diminished during subculturing. Conclusion: Fifth to 10th subcultured fibroblasts were the best cells to establish a human fibroblast bank. To prevent chromosomal abnormalities in fibroblast passaging، the best colony that is chromosomally stable and has lower enzymatic separation time should be selected.