خلاصة:
سارکوسیستیس از تک یاخته های کوکسیدیایی بوده و مولد کیستهای درون سلولی است. چهار گونه سارکوسیستیس در گوسفند شناسایی شده است. سارکوسیستیس تنلا و سارکوسیستیس آریتی کانیس مولد کیستهای میکروسکوپی بوده توسط سگسانان منتشر میشوند و بیماریزا هستند. سارکوسیستیس ژیگانته آ و سارکوسیستیس مدوزیفورمیس مولد کیست های میکروسکوپی بوده به وسیله گربه سانان منتشر میشوند و غیر بیماریزا هستند. برای تشخیص گونه های سارکوسیستیس روش های مختلفی وجود دارد. روش های سنتی معمولا تنها جهت تشخیص جنس انگل کاربرد دارد و با استفاده از این روش ها نمیتوان گونه را تشخیص داد. نتایج نشان داد که ۱۰۰% نمونه های گوشت آزمایش شده ۴۰/۴۰ آلوده به سارکوسیستیس آریتی کانیس بودند. همچنین ۱۰۰% نمونه های ماکروسکوپی ۲۰/۲۰ به سارکوسیستیس ژیگانته آ آلوده بودند. روش های RFLP-PCR و SSCP جدید توصیف شد در این مطالعه روشی حساس و مناسب جهت شناسایی گونه های مختلف سارکوسیستیس در گوسفند میباشد. به نظر میرسد این روش اختصاصی گونه میتواند به منظور انجام مطالعات اپیدمیولوژیک در سایر مناطق کشور مورد استفاده قرار گیرد
ملخص الجهاز:
بهطور ﻛﻠﻰ PCR ﺑﻪ دو ﻣﻨﻈﻮر اﺻﻠﻰ ﺑﻪ ﻛﺎر ﻣﻰ رود: اﻟﻒ) ﺗﻬﻴﻪ ﻧﺴﺨﻪ ﻫﺎي ﻣﺘﻌﺪد از ﻳﻚ ژن و ب) ﺑﺮرﺳﻰ ﺣﻀﻮر ﻳﺎ ﻋﺪم ﺣﻀﻮر ﻳﻚ ژن ﺧﺎص در ﻣﺠﻤﻮﻋﻪ ژﻧﻰ به تصویر صفحه مراجعه شود ﺷﻜﻞ 4- ﻧﺤﻮه ﺗﻜﺜﻴﺮ DNA ﺑﻪ روش PCR ٢-٤-٥-٣- ﭘﺮوﻓﺎﻳﻞ ﺣﺮارﺗﻰ ﺳﻴﻜﻞ ﻫﺎي PCR بهطور ﻛﻠﻰ در ﻃﻰ ﻫﺮ ﭼﺮﺧﻪ PCR، ﻣﺨﻠﻮط واﻛﻨﺶ در ﺳﻪ دﻣﺎي ﻣﺨﺘﻠﻒ ﻗﺮار ﻣﻰ ﮔﻴﺮﻧﺪ (ﺷﻜﻞ 5): اﻟﻒ) درﺟﻪ ﺣﺮارت ﺟﺪا ﻛﺮدن دو رﺷﺘﻪ (Denaturation temperature) ﻛﻪ ﻣﻌﻤﻮﻻ ﺣﺪود ٩٥-٩٢ درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﻰ ﮔﺮاد اﺳﺖ.
{مراجعه شود به فایل جدول الحاقی} 4- انواع تکنیک PCR برای شناسایی سارکوسیست 4-1- برش آنزیمی (PCR-RFLP) ﻣﺤﺼﻮل PCR اول bp)٩٧٠) ﻧﻤﻮﻧﻪﻫﺎى ﻣﺎﻛﺮوﻛﻴﺴﺖ و ﻫﻤﭽﻨﻴﻦ ﻧﻤﻮﻧﻪ ﻫﺎى ﻣﻴﻜﺮوﻛﻴﺴﺘﻰ ﻛﻪ در واﻛﻨﺶ دوم ﺑﺎﻧﺪ ﻧﺪاده ﺑﻮدﻧﺪ، ﺗﺤﺖ ﺗﺎﺛﻴﺮ آﻧﺰﻳﻢ آﻧﺪوﻧﻮﻛﻠﺌﺎز ﻣﺤﺪود ﻛﻨﻨﺪه SspI ﻗﺮار داده ﺷﺪﻧﺪ.
به تصویر صفحه مراجعه شود شکل21- ٤ ﻧﻤﻮﻧﻪ ي ﺣﺎﺻﻞ از اﻟﻜﺘﺮوﻓﻮرز ژل ﭘﻠﻰ آﻛﺮﻳﻞ آﻣﻴﺪ ١٠%، ﺳﺘﻮن ﻫﺎي ٢و ٢: ﻧﻤﻮﻧﻪ ي ﺷﻤﺎره ي ٢ ﺗﻜﺮار ﺷﺪه اﺳﺖ ﻛﻪ ﺑﺎﻧﺪﻫﺎي ﺣﺎﺻﻞ از آﻟﻮدﮔﻰ ﻫﻤﺰﻣﺎن ﺑﻪ دو ﮔﻮﻧﻪ ي ﺳﺎرﻛﻮﺳﻴﺴﺘﻴﺲ ﻛﺮوزي(٩٣٧(bp و ﺳﺎرﻛﻮﺳﻴﺴﺘﻴﺲ ﻫﻮﻣﻴﻨﻴﺲ(٩٢٦(bp را ﻧﺸﺎن ﻣﻰ دﻫﺪ.
به تصویر صفحه مراجعه شود شکل22- نمونههای ٦-١ اﻟﮕﻮﻫﺎي ﻳﻜﺴﺎن ﺣﺎﺻﻞ از ﻣﺤﺼﻮﻻت PCR ﮔﻮﻧﻪ ﺳﺎرﻛﻮﺳﻴﺴﺘﻴﺲ ﻛﺮوزي ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﺗﻜﻨﻴﻚ SSCP ﻣﻰ ﺑﺎﺷﺪ.
به تصویر صفحه مراجعه شود شکل23- نمونههای ١١،١٠،٧ اﻟﮕﻮﻫﺎي ﻳﻜﺴﺎن ﺣﺎﺻﻞ از ﻣﺤﺼﻮﻻت PCR ﮔﻮﻧﻪ ﺳﺎرﻛﻮﺳﻴﺴﺘﻴﺲ ﻛﺮوزي ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﺗﻜﻨﻴﻚ SSCP ﻣﻰ ﺑﺎﺷﺪ.