چکیده:
مقدمه: ویبریو کلرا (عامل بیماری وبا) یک پاتوژن مهم در بروز بیماری اسهال در بخشهای گستردهای از آسیا و آفریقا است. این باکتری یک پاتوژن رودهای است که میتواند سبب بروز بیماری همهگیر گردد. درنتیجه تشخیص سریع، حساس و اختصاصی ویبریو کلرا، مورد توجه اکثر آزمایشگاههای تشخیصی است. هدف از این پژوهش، طراحی و توسعه یک روش سنجش سریع ژنوم باکتری ویبریو کلرا بر اساس واکنش زنجیرهای پلیمراز ششگانه (Hexaplex PCR) است. مواد و روشها: پرایمر جهت شناسایی شش ژن بیماریزا و تنظیمی از باکتری ویبریو کلرا انجام شد. ژنهای مذکور شامل ژنهای کلرا توکسین زیر واحدهای A و (ctxA, ctxB) B، توکسین zot، انتروتوکسین کلرا (ace)، توکسین تنظیمی (tcp) و پروتئین غشاء خارجی (ompW) است. ژنوم نمونه استاندارد، با استفاده از پرایمرهای مذکور در واکنش زنجیرهای پلیمراز ششگانه، مورد مطالعه قرار گرفت. همچنین حساسیت و اختصاصیت سنجش مذکور نیز ارزیابی شد. یافتهها: انجام PCR ششتایی، حضور ژنهای بیماریزا و تنظیمی باکتری ویبریو کلرا را در نمونه استاندارد نشان داد. همچنین نتایج بیانگر اختصاصیت مناسب روش بوده و حساسیت آن تا حدود cfu 100 از باکتری محاسبه گردید. نتیجهگیری: از روش واکنش زنجیرهای پلیمراز ششگانه میتوان برای طراحی کیت تشخیصی عامل بیماری وبا استفاده نمود.
Background: Vibrio cholerae is an important agent of diarrheal
diseases in many parts of Asia and Africa. It is an enteric pathogen
which produce a global pandemic of the disease. Rapid, sensitive and
specific measurement of V. cholerae is an interest for many clinical
laboratories. The aim of this study was to design and develop a hexaplex
PCR assay for rapid detection of V. cholerae.
Materials and Methods : Six pair of primers were designed for specific
amplification of the virulence and regulatory genes for Vibrio
cholerae O1: cholera toxin enzymatic subunit A (ctxA) and B (ctxB),
zonula occludens toxin (zot), accessory cholerae enterotoxin (ace),
toxin- coregulated pilus (tcp) and outer membrane protein (ompW).
Hexaplex PCR carried out using six primers and standard genes.
Moreover, sensitivity and specificity of this method were determined.
Results: Hexaplex PCR showed the presence of the virulence and
regulatory genes for Vibrio cholerae O1 in the standard sample. In
addition, specificity was qualified and sensitivity determined 100
cfu/ml in this method.
Conclusion: Hexaplex PCR Assay could be used to design a kit for
cholerae detection.