خلاصة:
به منظور بررسی وجود سویههای بیماریزای یرسینیا انتروکولیتیکا در شیر پاستوریزه، طی سال 1390 تعداد 242 نمونه شیر پاستوریزه عرضه شده در تبریز جمعآوری گردید. نمونهها در محیط PSBB غنیسازی شد و از ژنهای ail و virFبه عنوان توالیهای هدف برای ردیابی سویههای بیماریزای یرسینیا انتروکولیتیکا در نمونههای غنی شده استفاده گردید. از نمونههای مثبت در آزمایش PCR در محیط CIN آگار وMacConkey آگار کشت داده شد و پرگنههای مشکوک با duplex-PCR تایید گردید. جهت تعیین بیوتیپ یرسینیا انتروکولیتیکا، جدایه باکتری به وسیله آزمونهای بیوشیمیایی مورد ارزیابی قرار گرفت. همچنین شمارش تعداد باکتریهای شاخص بهداشتی و آزمون کیفی فسفاتاز قلیایی (ALP) بر روی نمونههای شیر پاستوریزه انجام یافت. یرسینیا انتروکولیتیکای بیماریزا در 61/6% (16 نمونه) از نمونههای شیر پاستوریزه با روش ail-PCR ردیابی گردید. در حالی که 13/4% (10 نمونه) از نمونهها با روش virF-PCR مثبت تشخیص داده شد. از بین نمونههای مثبت در آزمایش PCR، فقط 41/0% (1 نمونه) به وسیله کشت جداسازی و با duplex-PCR تایید گردید. بر اساس آزمایشهای بیوشیمیایی، جدایه یرسینیا انتروکولیتیکا از نوع بیوتیپ 4 تعیین گردید. طبق نتایج مطالعه، 57/11% (28 نمونه) از نمونههای شیر پاستوریزه ALP مثبت بودند و تعداد باکتریهای شاخص بهداشتی در این نمونهها در قیاس با نمونههای ALP منفی تفاوت معنیدار (01/0>p) نشان داد. با توجه به حساسیت زیاد یرسینیا انتروکولیتیکا نسبت به حرارت پاستوریزاسیون، لذا آلودگی ثانویه میتواند دلیل اصلی حضور یرسینیا انتروکولیتیکای زنده در شیر پاستوریزه باشد
In order to investigate the presence of virulent Yersinia enterocolitica in pasteurized milk, 242 samples were collected from Tabriz retails from 2011 to 2012. The samples were enriched in PSBB. Afterwards, virF and ail genes were exploited as target sequences for the detection of virulent Y. enterocolitica. PCR-positive samples were cultured on CIN agar and MacConkey agar. The selected isolates were confirmed by second-phase duplex PCR. For the biotyping of Y. enterocolitica, certain biochemical tests were performed on the isolate. The pasteurized milk samples were further analyzed for the enumeration of hygiene indicator bacteria and qualitative alkaline phosphatase (ALP) test. Virulent Y. enterocolitica were detected in 6.61% (16/242) of samples by ail-PCR, however, using virF-PCR 4.13% (10/242) of the samples were identified as positive. Among PCR-positive samples only 0.41% (1/242) were isolated by culture method and confirmed by second-phase duplex-PCR. Based on the biochemical assays, the isolated Y. enterocolitica was identified as biotype 4. Furthermore, 11.57% (28/242) of the samples were found positive for alkaline phosphatase test. The results revealed that the number of hygiene indicator bacteria in ALP-positive samples was significantly (p<0.01) higher than ALP-negative samples. Since Y. enterocolitica is very susceptible to pasteurization process, cross contamination could be the main reason for the presence of virulent Y. enterocolitica in the pasteurized milk.
ملخص الجهاز:
نمونهها در محيط PSBB غنیسازی شد و از ژنهای ail و virFبه عنوان توالیهای هدف برای رديابی سويههای بيماريزای يرسينيا انتروکوليتيکا در نمونههای غنی شده استفاده گرديد.
لذا در اين مطالعه، تلفيقی از روشهای کشت و PCR که در مقايسه با بکارگيری انفرادی هر يک از اين روشها، حساسيت بسيار بيشتری در يافتن ارگانيسمها دارند، برای رديابی سويههای بيماريزای يرسينيا انتروکوليتيکا در شير پاستوريزه استفاده گرديد.
(**) عدم رديابی از مجموع 16 نمونه غنیسازی شده شير پاستوريزه که در مرحله اول آزمايش PCR مثبت تشخيص داده شدند (جدول 3)، يرسينيا انتروکوليتيکای بيماريزا فقط از 1 نمونه با روش کشت جداسازی و با duplex-PCR (با استفاده از ژنهای ail و virF) تأييد گرديد (شکل 1).
در مطالعات متعدد که با هدف تعيين ميزان شيوع يرسينيا انتروکوليتيکا در مواد غذايی انجام يافته است، ميزان شيوع اين باکتری با روش PCR به طور قابل ملاحظهای بالاتر از روشهای کشت گزارش گرديده است (Fredriksson-Ahomaa et al.
در اين مطالعه نيز نتايج به دست آمده نشان داد، در مقايسه با روش کشت متداول، روش virF-PCR با 10 برابر حساسيت بيشتر و روش ail-PCR با 16 برابر حساسيت بالاتر يرسينيا انتروکوليتيکای بيماريزا را در نمونههای شير پاستوريزه رديابی نموده است.